Chromatografia kolumnowa to technika stosowana do rozdzielania i oczyszczania związków w oparciu o ich interakcje z fazą stacjonarną i fazą ruchomą. Istnieje pięć głównych typów chromatografii kolumnowej:
Chromatografia adsorpcyjna:
Mechanizm: Opiera się na adsorpcji związków na fazie stacjonarnej.
Faza stacjonarna: Ciało stałe, takie jak żel krzemionkowy lub tlenek glinu.
Faza mobilna: Ciecz lub gaz przemieszczający próbkę przez kolumnę.
Aplikacja: Separacja związków niepolarnych lub średnio polarnych.
Chromatografia podziałowa:
Mechanizm: Separacja polega na podziale związków pomiędzy dwie fazy ciekłe: jedną związaną z fazą stacjonarną i drugą pełniącą rolę fazy ruchomej.
Faza stacjonarna: Ciecz powlekana na obojętnym stałym podłożu.
Faza mobilna: Ciecz przepływająca przez kolumnę.
Aplikacja: Separacja związków polarnych, takich jak aminokwasy i białka.
Chromatografia jonowymienna:
Mechanizm: W oparciu o przyciąganie elektrostatyczne pomiędzy naładowanymi związkami i przeciwnie naładowaną fazą stacjonarną.
Faza stacjonarna: Żywica jonowymienna zawierająca naładowane grupy.
Faza mobilna: Ciekły bufor o różnej sile jonowej i pH.
Aplikacja: Oczyszczanie biomolekuł, takich jak białka, peptydy i nukleotydy.
Chromatografia z filtracją żelową (chromatografia wykluczania wielkości):
Mechanizm: Rozdziela związki na podstawie ich wielkości cząsteczkowej.
Faza stacjonarna: Porowate kulki żelowe, takie jak Sephadex lub agaroza.
Faza mobilna: Rozpuszczalnik wodny lub organiczny.
Aplikacja: Separacja makrocząsteczek, takich jak białka i polimery.
Chromatografia powinowactwa:
Mechanizm: Wykorzystuje specyficzne interakcje między danym związkiem a ligandem przyłączonym do fazy stacjonarnej.
Faza stacjonarna: Matryca z unieruchomionymi ligandami (np. przeciwciałami, enzymami lub cząsteczkami receptora).
Faza mobilna: Bufor w płynie; elucję zwykle osiąga się poprzez zmianę pH, siły jonowej lub dodanie konkurencyjnej cząsteczki.
Aplikacja: Wysoce specyficzne oczyszczanie biomolekuł, takich jak enzymy, przeciwciała i kwasy nukleinowe.
Każdy rodzaj chromatografii dobierany jest w oparciu o właściwości rozdzielanych związków i pożądane zastosowanie.